| 產(chǎn)品編號 | CS102 |
| 英文名稱 | Lymphocyte Separation Medium (Human) |
| 中文名稱 | 人外周血淋巴細胞分離液 |
| 保存條件 | 室溫避光保存，2年有效. |
| 注意事項 | This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications. |
| 產(chǎn)品介紹 |
產(chǎn)品簡介： 本產(chǎn)品是一種用于分離人外周血淋巴細胞的無菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。適用于從人抗凝血液中分離單個核細胞（主要為淋巴細胞），無菌條件下所分離的細胞可用于免疫學檢測。其分離原理是根據(jù)血細胞的密度差異（紅細胞和粒細胞密度為1.090 g/mL左右；淋巴細胞和單核細胞密度為1.075~1.090 g/mL；血小板為1.030~1.035 g/mL），為此，將葡聚糖（右旋糖酐）和泛影酸鈉按一定比例混合，調(diào)整比重、pH 值和滲透壓，經(jīng)過澄清及過濾除菌后制成一種密度在1.077g/ml 并且近于等滲的溶液（分層液），經(jīng)過密度梯度離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將各種血細胞加以分離。通過離心使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布，從而將淋巴細胞從人外周血或臍帶血中分離出來。 產(chǎn)品參數(shù)： 密度：1.077±0.001g/mL 滲透壓：290~350 mOsm/kg H2O 無菌：0.1μm 濾膜過濾 操作步驟： 操作步驟： 1. 取新鮮抗凝全血（EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可）或者去纖維蛋白血液，用等體積（1:1）的全血及組織稀釋液或者PBS稀釋全血。 2. 在離心管中加入適量分離液（當稀釋后血液體積小于3mL時，加入3mL分離液；大于等于3mL，加入等體積分離液。但二者的總體積不能超過離心管的三分之二，否則會影響分離效果），將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方，注意保持兩液面界面清晰。（可以使用巴氏德吸管吸取血液，然后將血液小心的平鋪于分離液上，因為兩者的密度差異，將形成明顯的分層界面。如果樣品較多加樣時間較長，在離心之前出現(xiàn)紅細胞成團下沉屬正?，F(xiàn)象。） 3. 室溫，水平轉(zhuǎn)子500~1000g，離心20~30min（血液的體積越大所需的離心力越大，離心時間越長，最佳的分離條件需摸索，離心轉(zhuǎn)速最大不超過1200g）。 4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層：最上層是稀釋的血漿層，中間是透明的分離液層，血漿與分離液之間的白膜層即為淋巴細胞層，離心管底部是紅細胞與粒細胞。 5. 小心的吸取白膜層細胞到15mL潔凈的離心管中，10mL PBS或細胞洗滌液洗滌白膜層細胞。250g，離心10min。 6. 棄上清，5mL的PBS或細胞清洗液重懸細胞，250g，離心10min。 7. 重復(fù)步驟 6 8. 棄上清，細胞重懸備用。 分離純度： 使用人外周血淋巴細胞分離液分離的淋巴細胞純度大于90%。 注意事項： 1. 開封前顛倒混勻，本分離液為無菌產(chǎn)品，為延長分離液保存時間，請在無菌條件下啟封，避免污染。 2. 本分離液要求血液為新鮮抗凝血（采血2 h以內(nèi)），避免冷凍和冷藏；如果要進一步對分離的細胞進行培養(yǎng)，在收集血液和分離過程中，注意無菌操作，避免微生物污染。 3. 本實驗要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為（18℃~25℃）。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液置于20℃水浴中復(fù)溫20分鐘以保證分離溫度。4℃或者是溫度較低的條件下離心，可能會導致白膜層中紅細胞污染加重。 4. 稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。 5. 由于各品牌離心機的性能不同，實驗室環(huán)境溫度差異，可能影響分離效果，用戶可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，摸索最佳的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。 6. 部分塑料制品（如聚苯乙烯）因其帶有的靜電作用，可能會導致細胞掛壁，影響分離效果。最好使用無靜電反應(yīng)的離心管，推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。 7. 最優(yōu)抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素。應(yīng)注意在血液稀釋過程中應(yīng)去除抗凝劑體積。 8. 血液樣本的粘稠度或者是溫度差異，可能會影響分離效果，可以調(diào)節(jié)離心轉(zhuǎn)數(shù)和離心時間，請摸索最佳的分離條件。 9. 吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加；吸取過多的血漿層可能會導致淋巴細胞中血漿蛋白及血小板污染。 10. 不同動物血液在不同比重分離液中的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應(yīng)提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。 可能存在的問題及解決方法： 1. 離心后目的細胞存在于血漿層或稀釋液層，可能原因是轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短，解決辦法可以適當增加轉(zhuǎn)速。 2. 離心后目的細胞存在于分離液中，可能原因是轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長，解決辦法可以適當減低轉(zhuǎn)速。 3. 離心后白膜層彌散，可能原因是細胞密度過大，解決辦法適當調(diào)整細胞密度。 4. 離心后白膜層太淺或看不見，可能原因是細胞密度過小，解決辦法適當調(diào)整細胞密度。 |
| 1、抗體溶解方法 | |
| 2、抗體修復(fù)方式 | |
| 3、常用試劑的配制 | |
| 4、免疫組化操作步驟 | |
| 5、免疫組化問題解答 | |
| 6、Western Blotting 操作步驟 | |
| 7、Western Blotting 問題解答 | |
| 8、關(guān)于肽鏈的設(shè)計 | |
| 9、多肽的溶解與保存 | |
| 10、酶標抗體效價測定程序 | |
