本期導(dǎo)讀：IHC（Immunohistochemistry, 免疫組織化學）是用標記的特異性抗體（或抗原）對組織內(nèi)抗原（或抗體）的分布進行組織和細胞原位檢測的技術(shù)。IHC實驗中保護組織的兩種主要方法是對組織進行石蠟包埋和冰凍，其中石蠟包埋是制作組織標本最常用、最基本的方法。
石蠟包埋對于組織形態(tài)保存完好，且能作連續(xù)切片，有利于各種染色對照觀察；還能長期存檔，供回顧性研究。實驗組織保護的質(zhì)量是保證病理報告準確性的重要環(huán)節(jié)。
本期將介紹石蠟包埋過程中容易忽略，但對實驗結(jié)果影響很大的實操注意點。
常規(guī)的石蠟包埋過程包括五個基本步驟：固定，脫水，透明，浸蠟和包埋。
1、固定
取新鮮組織浸泡在4%多聚甲醛或10%福爾馬林溶液中固定24-48h。固定完后自來水沖洗五次，各30min。
Tips：① 組織離體后應(yīng)在30min之內(nèi)固定。
2、脫水② 固定液容積應(yīng)為組織的5-10倍，固定時間根據(jù)組織大小而定，固定時間過長，修復(fù)后抗原暴露不完全；時間過短則固定不充分。
③ 脫水機內(nèi)固定液必須及時更換。
④ 固定后應(yīng)水洗，否則易造成脫片和染色不新鮮，也不利于蠟塊內(nèi)抗原、基因的保存。
組織經(jīng)過50%、70%、85%、95%的梯度酒精各30min，無水乙醇兩次，每次30min完成脫水。
Tips：
① 未經(jīng)充分固定的組織不得進去脫水步驟。固定、脫水溫度不得超過37℃。
② 用于脫水的試劑容積應(yīng)為組織總體積的5-10倍以上。
③ 由低向高濃度酒精脫水，級差越小越好，
④ 量大或條件允許，可將大小組織分開脫水，較大組織塊脫水時間長與較小者。
⑤ 組織至于無水乙醇內(nèi)的時間不宜過長，以免硬化。
3、透明
分別經(jīng)過無水乙醇：二甲苯、二甲苯（Ⅰ）（根據(jù)組織透明度，可減少或增加第二遍二甲苯透明的時間）、二甲苯（Ⅱ）各30min。
Tips：
① 二甲苯的容積應(yīng)為組織總體積的5-10倍以上。
② 透明度時間適宜，依不同種類組織及其大小而異（子宮肌瘤、食管等堅硬組織延長；肝臟，小組織縮短）組織呈現(xiàn)棕黃或暗紅色透明即可。
③ 二甲苯應(yīng)及時過濾、更換。
4、浸蠟
蠟Ⅰ，蠟Ⅱ各30min.
Tips：
5、包埋石蠟溫度控制在58-62℃，高于熔點2℃為佳。
將金屬托放入熔化的石蠟，再放入組織，冷固待石蠟?zāi)獭?
Tips：
① 防止各種異物組織包入蠟塊內(nèi)。
② 包埋應(yīng)先放石蠟后放組織，速度盡可能快，以免凝固。
③ 包埋用熔蠟應(yīng)純凈，熔點與浸蠟的相近。
④ 包埋時不得使用明火，以防點燃，鑷子不可溫度過高，以免燙傷組織。
⑤ 包一個換一把鑷子，防止污染。
⑥ 囊壁、管腔豎直包埋，所需切面向下包埋；扭曲組織正后包埋；多個小組織可以包在一個面。
《IHC/IF/ICC實驗方案流程圖及所需試劑》
